熒光定量PCR檢測技術服務-Taqman探針法

簡要描述：熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前已得到廣泛應用;實時熒光定量PCR：在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

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廠商性質：生產廠家
更新時間：2024-05-13
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產品介紹：

實時熒光定量PCR技術（Real Time Quantitative PCR）

在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

相對定量應用（Relative Quantification，RQ）

特異性熒光標記：

TaqMan法

TaqMan探針的特性：

（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等

（2）3′端標記有熒光淬滅基團（Quencher, Q）

（3）探針完整，R所發射的熒光能量被Q基團吸收，無熒光， R與Q分開，發熒光

（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針

相對定量通過內標定量：
內標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數恒定，受環境因素影響小，內標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數量。

相對定量分析方法：

2-ΔΔCt
前提：目標序列和內參序列的擴增效率接近100％且偏差在5％以內
1、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、計算表達水平比率：
2 –ΔΔCT=表達量的比值

服務流程：

步驟	客戶提供	服務內容	基屹提供
1	新鮮的且盡量多的材料；已知的全長基因序列；盡可能詳細的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等。	DNA/RNA提取，根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。
2	純化好的DNA/RNA（大于5 ug/樣品）；已知的全長基因序列；盡可能詳細的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等。	根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。
3		以DNA為模板，對目的基因進行熒光定量PCR檢測分析	提供完整的定量分析結果、實驗熒光定量擴增曲線及詳細的實驗步驟。