DMEM培養(yǎng)基成分分析實驗步驟

　　DMEM培養(yǎng)基成分分析實驗步驟
　　DMEM培養(yǎng)基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基,分為高糖和低糖,碳酸氫鈉緩沖體系.是在Eagle MEM基礎上增加了各成分的用量(加倍),葡萄糖可以選擇低糖(1000mg/L)和高糖(4500mg/L),對于生長速度快,附著性差的腫瘤細胞生長有利.特別在附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養(yǎng)時,采用高糖濃度的培養(yǎng)基效果較好,常用于雜交瘤技術中骨髓細胞和DNA轉染的轉化細胞培養(yǎng)以及疫苗生產和各種初代病毒宿主細胞的細胞培養(yǎng)及單一細胞培養(yǎng).高糖型有利于細胞停泊于一個位置生長,適于生長較快、附著較困難腫瘤細胞等.
　　改良的DMEM培養(yǎng)基是為小鼠成纖維細胞設計的,現(xiàn)在常用于貼壁細胞的培養(yǎng).DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用.
　　DMEM培養(yǎng)基成分分析實驗步驟:
　　1、取清洗干凈的500mL大燒杯一個,加入新鮮制備的三蒸水約300mL,加熱至15~30℃;
　　2、將DMEM干粉袋豎立輕彈,使袋中粉下沉,剪開袋口,將干粉倒入500mL的大燒杯中,用超純水沖洗袋2~3次;
　　3、放入清洗干凈的磁子,在磁力攪拌器充分攪拌,以確保培養(yǎng)基干粉充分溶解;
　　4、根據配方要求,加入準確稱取的NaHCO31.85g,L-谷氨酰胺0.1g,充分搖勻至*溶解;
　　5、加入已經制備好的雙抗溶液,使青霉素和鏈霉素的使用濃度達到100ug/mL;加入培養(yǎng)基總體積約10%的已滅活的小牛血清;
　　6、用濃度為7.4%的NaHCO3溶液調整溶液的pH值為7.2~7.4,加超純水定容,并將培養(yǎng)液轉入鹽水瓶;用一次性濾器過濾上述培養(yǎng)液到滅菌的鹽水瓶,封口,4℃保存?zhèn)溆?